文章目录

1 材料与方法

1.1 材料

    1.1.1 菌株

    1.1.2 培养基

    1.1.3 主要试剂及仪器

1.2 方法

    1.2.1 平板点菌实验

    1.2.2 最低抑菌浓度测定

    1.2.3 gcsA和gcsA基因缺失菌株的构建

    1.2.4 细胞内ROS检测

2 结果与分析

2.1 常见氨基酸抗菌效果

2.2 ε-PL与抗真菌药物的协同作用

2.3 GSH与抗真菌药物的拮抗作用

2.4 外源添加GSH能够部分恢复ΔgcsA的致死表型

2.5 ITC和ε-PL联合用药时菌体内ROS含量变化

3 讨 论

文章摘要:为了解多肽ε-多聚赖氨酸和谷胱甘肽对常见抗真菌药物体外抗人类病原真菌烟曲霉效果的影响,利用平板点菌实验、最低抑菌浓度实验中的微量液基法和E-test法,以及ROS检测等方法研究ε-多聚赖氨酸和谷胱甘肽在抗真菌药物体外抗烟曲霉过程中的作用以及可能的作用机制。通过基因定点敲除谷胱甘肽合成酶基因gcsA和gshA观察细胞内谷胱甘肽对于烟曲霉生长的重要性。结果显示,ε-多聚赖氨酸与抗真菌药物尤其是卡泊芬净和伊曲康唑呈协同作用;而谷胱甘肽则能够明显地拮抗伊曲康唑和卡泊芬净的抗烟曲霉作用。ε-多聚赖氨酸与伊曲康唑联用时菌体内的ROS含量比单独使用伊曲康唑时显著增多,而谷胱甘肽与伊曲康唑联用时菌体内的ROS含量比伊曲康唑单独使用时减少。基因敲除实验结果显示γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酸合成酶基因gcsA为烟曲霉生长必需基因,而谷胱甘肽合成酶基因gshA对生长没有明显影响。结果表明,ε-多聚赖氨酸与谷胱甘肽影响了伊曲康唑和卡泊芬净对烟曲霉的作用。ε-多聚赖氨酸通过促进伊曲康唑刺激细胞产生ROS诱导烟曲霉死亡从而实现协同作用。谷胱甘肽为细胞内必需还原型多肽,通过消除胞内伊曲康唑诱导产生的ROS从而产生拮抗作用。

文章关键词:ε-多聚赖氨酸,谷胱甘肽,抗真菌药物,协同与拮抗作用,ROS,烟曲霉,

项目基金:国家自然科学基金项目(31500055),

论文作者:仲国维 娄新宇 徐凤娇 曹佳颐 吕荟杰 

论文分类号: R96

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